Молекулярная генетика, микробиология и вирусология №4 2007

Смирнова Н. И., Крепостнова И. М., Ливанова Л. Ф., Заднова С. П., Еремин С. А., Ильина Т. С.

Авирулентный штамм Vibrio cholerae — продуцент B-субъединицы холерного токсина: получение и молекулярно-генетический анализ

Для введения в клетки холерного вибриона клонированного гена ctxB, кодирующего биосинтез B-субъединицы холерного токсина (CT), сконструирована конъюгативная рекомбинантная плазмида pIEM3(KmRTcR). Она получена при коинтеграции двух плазмид — конъюгативной pIEM1(KmR), несущей транспозон mini-kan и IS1-элемент, и pCTΔ27(TcR), производной pBR322 с клонированным геном ctxB. В качестве штамма — носителя плазмиды рIEM3 выбран авирулентный штамм V. cholerae, лишенный по данным ПЦР-анализа ключевых структурных и регуляторных генов патогенности и несущий мутацию в одном из генов O1-антигена. Показано, что в клетках холерного вибриона в 5% случаев происходит разъединение коинтеграта с последующим сохранением лишь многокопийной плазмиды pCTΔ27, в результате чего появляются TcRKmS-клоны с высоким уровнем продукции секретируемой B-субъединицы CT (10—14 мкг/мл), один из которых (КМ93) взят в качестве штамма — продуцента этого белка. С помощью молекулярно-генетических и биохимических методов изучены особенности наследования и экспрессии клонированного гена ctxB в клетках штамма КМ93.
Обнаружено, что экспрессия гена ctxB не зависит от присутствия в хромосоме ключевых регуляторных генов toxR, tcpP, tcpH, toxT. Получены сведения об эффективной продукции B-субъединицы CT при выращивании созданного штамма — продуцента в производственных условиях.