Молекулярная генетика, микробиология и вирусология №4 2009

А. С. Семихин, А. М. Лящук, М. В. Мезенцева, М. И. Трегубова, О. В. Сергиенко, Н. Н. Полетаева, Б. С. Народицкий, А. С. Карягина, В. Г. Лунин, А. Л. Гинцбург
НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи РАМН, Москва

Для корреспонденции:  Семихин А. С. — сотрудник НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи Москва, 123098, ул. Гамалеи, д. 18
E-mail: shadooo@yandex.ru

ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА-β ЧЕЛОВЕКА НА ОСНОВЕ ТЕХНОЛОГИИ АФФИННЫХ ДОМЕНОВ

В клетках Escherichia coli клонирован слитный ген, состоящий из фрагментов, кодирующих декстрансвязывающий домен декстрансахаразы микроорганизма Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides (DBD) и рекомбинантный интерферон-β (IFN-β) человека, между которыми встроена нуклеотидная последовательность, кодирующая сайт гидролиза энтеропептидазы человека (DDDDК). Создан эффективный бактериальный штамм-продуцент химерного белка DВD-IFN-β, состоящего из последовательности IFN-b, спейсера из 10 чередующихся остатков глицина и серина, сайта гидролиза энтеропептидазы человека и декстрансвязывающего домена. Свободный рекомбинантный IFN-b человека получен после гидролиза энтеропептидазой препарата белка DВD-IFN-β, иммобилизованного на сефадексе G-25. Показана способность рекомбинантного IFN-β в свободной форме и иммобилизованного на сефадексе защищать клетки от вирусной инфекции.
Разработанный подход может быть использован для получения рекомбинантных белков, обладающих различной биологической активностью. В дальнейшем эти белки могут послужить основой для производства новых иммуномодулирующих, противовирусных препаратов, ростовых факторов, препаратов, способных замедлять рост опухолевых клеток и др.

Ключевые слова:  рекомбинантный интерферон-β человека

ЛИТЕРАТУРА

1. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. — М., 1984.

2. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р. У. Хабриева. — 2-е изд. — М., 2005.

3. Karsten H., Joanne C. The QIAexpressionist. — 1992.

4. Kaseda K., Kodama T., Fukui K., Hirose K. // FEBS Lett. — 2001. — Vol. 500. — P. 141—144.

5. Kobayashi M., Mihara K., Matsuda K. // Agric. Biol. Chem. — 1986. — Vol. 50. — P. 551—557.

6. Laemmli U. // Nature. — 1970. — Vol. 227. — P. 680—682.

7. Paul F., Auriol D., Oriol E., Monsan P. // Ann. N. Y. Acad. Sci. — 1984. — Vol. 434. — P. 267—270.

8. Sanger F., Coulson A. // J. Mol. Biol. — 1975. — Vol. 94. — P. 441—446.

9. Scheich C., Sievert V., Bussow K. // BMC Biotechnol. — 2003. — Vol. 3, N 1. — P. 12.

10. Suwannarangsee S., Moulis C., Potocki-Veronese G. et al. // FEBS Lett. — 2007. — Vol. 581. — P. 4675—4680.

11. Terpe K. // Appl. Microbiol. Biotechnol. — 2003. — Vol. 60, N 5. — P. 523—533.